第十五次免疫组化质控活动存在的问题分析
今天是2018年09月25日
第十五次免疫组化质控活动存在的问题分析
发表时间:2017-08-10

单位编号: 6

得分:P63(5分)

问题:没有信号

原因:推测可能与柠檬酸盐pH6.0进行抗原修复,或采用SP检测方法有关;但同组检测TTF-1染色结果较理想,不排除操作过程中某一环节遗漏。

建议:对于检测细胞核的试剂,建议采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。最好使用二步法进行检测,可以尝试采用EnVision、MaxVision等检测方法。

单位编号:8

得分:TTF1(12分)

问题:阳性信号弱,部分阳性区域未显色

原因:可能与柠檬酸盐pH6.0进行抗原修复有关。

建议:对于检测细胞核的试剂,建议采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。

单位编号:11

得分:TTF1(5分)

问题:染色信号很弱,染色背景深。

原因:可能与一抗孵育时间过短(37℃,30分钟),或使用柠檬酸盐pH6.0进行抗原修复有关;一抗与二抗试剂公司不同可能会影响染色结果。

建议:一抗孵育时间调整为夏日50分钟,冬日1小时。使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。染色过程中避免组织干片,尽量使用同一公司试剂。

单位编号:16

得分:CK5/6(8分)、P63(9.5分)

问题:CK5/6染色信号很弱,几乎无法判读;P63染色弱,影响判读,部分组织中央有阳性信号,但周边没有信号。

原因:与一抗孵育时间过短(40分钟)有关,或可能与一抗与二抗试剂来自不同公司,作用效果受影响。

建议:使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。延长一抗孵育时间,夏日40-50分钟,冬日1小时。染色过程中避免干片。

单位编号:26

得分:Napsin(11分)

问题:抗原暴露太少,阳性信号弱。

原因:可能与抗原修复不足或抗体浓度不佳有关。

建议:高压修复时间适当调整,应为喷气后2分钟左右。抗体滴加时应该组织上的水分甩干;染色过程中避免干片。

单位编号:32

得分:CK5/6(7.5分)

问题:信号弱,影响判读。

原因:可以与二抗孵育时间太长(60分钟)或抗体浓度不理想有关。

建议:适当缩短二抗孵育时间,新抗体在使用前先用阳性对照进行测试,找到最佳染色浓度;染色过程中试剂要完全覆盖检测组织,避免组织干片。

单位编号:33

得分:CK5/6(9分)

问题:信号弱

原因:可能与一抗稀释浓度或与一抗孵育时间过短(25℃,20分钟)有关;一抗与一抗稀释液来自不同的试剂公司可能会影响染色结果。

建议:一抗浓度梯度稀释测试,找到最佳染色浓度,一抗孵育时间调整为夏日50分钟,冬日1小时。尽量使用同一公司试剂。使用机器染色时,需要先将机器调试好。

单位编号:48

得分:CK5/6(5分)

问题:无信号。

原因:推测可能与采用SP检测方法或一抗与二抗采用不同公司试剂有关。

建议:最好使用二步法进行检测,可以尝试采用EnVision、MaxVision等检测方法。尽量使用同一公司试剂。

单位编号:60

得分:CK5/6(5分)

问题:CK5/6染色切片无阳性信号。

原因:可能的原因包括;抗体失效、操作步骤遗漏等。

建议:检查CK5/6抗体的有效期,重新配制修复液,染色过程中尽量仔细,避免步骤遗漏和染色切片干片。

单位编号:88

得分:P63(5分)

问题:染色太弱,影响判读

原因:可能与使用柠檬酸修复液、修复方法或组织干片有关。

建议:使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。高压修复时间适当调整,应为喷气后2分钟左右。染色过程中避免干片。

单位编号:93

得分:Napsin(11.5分)

问题:信号太弱,影响判断。

原因:没有提供染色操作信息。

建议:检测抗体有效浓度。

单位编号:97

得分:CK5/6 (11.5分),P63(6分) TTF1(5分)

问题:CK5/6组织飞片,仅见少量阳性信号;P63切片仅于一侧见少量弱的阳性信号,染色不匀,信号弱,影响判断;TTF-1染色切片无信号;

原因:可能与修复温度过高(240℃)、使用柠檬酸修复液、修复方法和抗体滴加不匀有关;

建议:高压修复喷气后2分钟;或微波炉,先用高档3分钟烧开,再换成低档维持15-20分钟。P63建议使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。操作过程中,尽量将切片上的水分擦拭干,以免稀释抗体浓度。

单位编号:100

得分:CK5/6(10.5分)

问题:背景黄,有非特异性着色

原因:可能染色过程中组织干片或切片冲洗不彻底有关。

建议:染色过程中,尽量避免组织干片;冲洗抗体过程中,应每次冲洗三遍。

单位编号:115

得分: P63 (6分),TTF1(10.5分)

问题:P63背景黄,非特异性着色,无明确核着色之阳性信号;TTF1染色弱,影响判断。

原因:可能一抗孵育时间过短(25℃,20分钟)、修复时间不足、染色过程中组织干片或切片冲洗不彻底以及使用柠檬酸修复液修复方法。

建议:一抗孵育时间,夏日50分钟,冬日1小时。高压修复喷气后2分钟;或微波炉,先用高档3分钟烧开,再换成低档维持15-20分钟 。P63建议使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。染色过程中,尽量避免组织干片;冲洗抗体过程中,应每次冲洗三遍。

单位编号:119

得分:P63 (5.5分),TTF1(8分)

问题:P63无信号;TTF1信号太弱,影响判断。

原因:可能试剂有效性、修复方法不当、采用SP检测方法或操作步骤失误等有关。

建议:最好使用二步法进行检测,可以尝试采用EnVision、MaxVision等检测方法。尽量使用同一公司试剂。检测试剂有效期及检测有效性(做阳性对照切片染色)。染色过程中,尽量避免组织干片。

单位编号:121

得分:CK5/6(9分),P63 (11分),TTF1(10分)

问题:CK5/6无明确阳性信号,背景黄;P63背景黄,非特异性着色,影响判读;TTF1有背景,阳性信号判断不清。

原因:可能与采用SP检测方法、染色过程中组织干片或显色时间过长(10分钟)有关。

建议:最好使用二步法进行检测,可以尝试采用EnVision、MaxVision等检测方法。高压修复喷气后2分钟;或微波炉,先用高档3分钟烧开,再换成低档维持15-20分钟。染色过程中,尽量避免组织干片。DAB显色时间应该在显微镜下控制。

单位编号:125

得分:Napsin(10分)

问题:从提供的染色技术方法中,没有发现明显问题;推测可能与染色过程中一抗浓度不足或显色时间过短可能会影响显色结果。

建议:染色过程中,尽量避免组织干片,滴加抗体时,应尽量将组织上的水分甩干。显色时间可适当延长。

单位编号:127

得分:CK5/6(6分),P63(8.5分),Napsin(5分)

问题:CK5/6几乎无阳性信号;P63切片仅于一侧见少量弱的阳性信号,影响判断;Napsin无阳性信号。

原因:可能与使用柠檬酸修复液修复方法和抗体滴加不匀有关;

建议:检测 CK5/6试剂的有效浓度;P63建议使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。操作过程中,尽量将切片上的水分擦拭干,以免稀释抗体浓度。Napsin抗体检测有效性,滴加抗体时,应尽量将组织上的水分甩干。

单位编号:142

得分:P63(11分)

问题:检测组织中有一块病变细胞胞浆呈非特异性着色

原因:可能与试剂不同克隆号有关。

建议:再将P63抗体进行检测,如有必要,可以更换试剂克隆号。

单位编号:144

得分:Napsin(8.5分)

问题:阳性信号很弱,影响判断。

原因:可能修复方法不当有关。

建议:高压修复喷气后2分钟;或微波炉,先用高档3分钟烧开,再换成低档维持15-20分钟。染色过程中,尽量避免组织干片。

单位编号:145

得分: CK5/6(5分),TTF1(10.5),Napsin(5.5分)

问题:CK5/6无阳性信号;TTF1抗体在肺组织病变中没有明确阳性信号;Napsin阳性信号很弱,影响判断。

原因:CK5/6可能与一抗孵育时间太短(20分钟)有关。可能与一抗TTF1选用的克隆号不同有关;Napsin可能与一抗孵育时间太短(30分钟)有关。

建议: TTF-1抗体如果在肺组织病变中,通常使用的是染肺腺上皮细胞的克隆号抗体;Napsin和CK5/6试剂在使用前先检测有效性, 一抗孵育时间在冬天应该延长至60分钟。

单位编号:147

得分:TTF1(8.5),Napsin(11.5分)

问题:TTF1 和Napsin背景黄,复染深,阳性信号太弱;

原因:可能与使用柠檬酸修复液修复方法有关;

建议:TTF1建议使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。操作过程中,尽量将切片上的水分擦拭干,以免稀释抗体浓度。冲洗抗体过程中,应每次冲洗三遍。苏木素复染后,应该进行返蓝。

单位编号:154

得分: TTF1(11.5),Napsin(6分)

问题:TTF1阳性信号弱;Napsin几乎无阳性信号。

原因:TTF1可能与使用柠檬酸修复液修复方法有关;Napsin染色无信号可能与试剂或操作不当有关。

建议:TTF1建议使用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0进行修复。操作过程中,尽量将切片上的水分擦拭干,以免稀释抗体浓度。Napsin试剂有使用前先检测有效性,操作过程中避免干片,滴加试剂时就尽量将组织上的水分甩干。